研发人员都知道，样本稀释液用于调整样本浓度、粘度和基质效应，使其符合后续检测步骤的要求，确保结果的准确性和可靠性。而加阻断剂的目的是消除或减少检测过程中存在的内源性干扰物质对检测结果的影响，避免假阳性或假阴性的发生。

那么，一个看似顺理成章的想法，将阻断剂直接加入样本稀释液中，岂不是一步到位，既稀释了样本又消除了干扰？但是在样本稀释液中直接添加阻断剂，往往并非最优选择，甚至会带来负面影响，需要谨慎为之。

01 阻断剂非“万能钥匙”

阻断剂并非对所有干扰都一视同仁，其作用机制和效果具有特定性：

作用机制差异，阻断剂主要分为被动阻断剂和主动阻断剂。被动阻断剂通过“饱和”干扰抗体的结合位点来阻止其与检测抗体结合；主动阻断剂则直接高亲和力结合并中和干扰抗体。无论哪种机制，其有效性高度依赖于干扰物质的类型、浓度以及阻断剂本身的特性，如种属来源、浓度、亲和力。

并非所有干扰皆可除， 样本中存在的干扰物质种类繁多且复杂，除了上述抗体类干扰，还包括脂血、溶血、黄疸、某些药物及其代谢物、高浓度的生物分子等。阻断剂主要针对的是抗体类干扰，对其他基质效应的消除能力有限甚至无效。

引入新的干扰或影响， 阻断剂本身含有复杂的蛋白质和其他生物分子。将其加入样本稀释液，意味着所有样本在检测前都会被这些外源物质“污染”。这有可以：改变样本原始状态，稀释样本的同时引入了额外的生物活性物质，改变样本的原始基质，影响后续抗原-抗体反应的真实环境；产生新的交叉反应，阻断剂中的某些成分可能与检测系统中的抗体或样本中的其他成分发生非特异性结合，反而引入新的干扰信号，导致背景升高或特异性下降；稀释目标分析物，虽然稀释液本身就在稀释样本，但额外添加阻断剂意味着需要更高的浓度才能有效，这导致目标分析物被过度稀释，影响低浓度样本的检出。

02 样本稀释液的核心要求保持“纯净”与“中性”

样本稀释液的作用是标准化样本，将不同来源、不同状态的样本，如不同粘度的血清/血浆，调整到相对一致的物理状态，如粘度、渗透压，减少因样本差异带来的检测波动。

还有就是优化反应环境， 提供适宜的pH值、离子强度等，为后续的抗原-抗体反应或酶促反应创造最佳条件。最小化基质效应，通过缓冲体系等，尽量降低样本中非目标成分对检测信号的抑制或增强作用。

稀释液即在不影响目标检测物的前提下，为检测反应提供一个稳定、一致的平台。将阻断剂这种具有特定生物活性、旨在主动干预干扰过程的复杂成分直接加入稀释液，标存在潜在冲突。 

03 如何添加阻断剂？

既然在样本稀释液中直接添加阻断剂存在诸多潜在问题，那么更有效、更安全的策略是什么？

可以将阻断剂置于检测系统的“下游”：加入偶联物/酶标液/标记物垫， 这是目前被广泛认可的更优方案。在标记抗体或酶结合物的工作液中加入适量阻断剂。此时，样本已经过稀释，其中的干扰物质在接触到关键的检测抗体/标记物之前，先与反应液中的阻断剂结合并被中和。这样既达到了阻断干扰的目的，又避免了对原始样本基质的过早干预，阻断剂在此环节直接保护了最关键的检测组分。

加入样本垫处理液（层析法）： 对于胶体金等免疫层析试剂，将阻断剂加入样本垫的处理液中，让样本在层析开始前就与阻断剂作用，也是一种有效且常用的方法。

优化阻断剂配方与浓度时，尽量用高效、低浓度、特异性强的主动阻断剂，减少其加入量，从而最大程度降低其对检测系统本身的影响。在试剂开发源头，优先选用对常见内源性干扰（如RF、HA）敏感性低的抗体配对，或采用能减少此类干扰的方法学，如使用F(ab')2片段抗体。

综上所述，在体外诊断试剂的样本稀释液中直接添加阻断剂，虽然意图良好，但往往弊大于利。